Capítulo
3. Las curvas de calibración
por Celia E.Coto*
Profesora Titular Consulta de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. UBA
Investigadora Superior del CONICET.
En el capítulo 1 nos hemos referido a la importancia del uso de un blanco o control para darle validez al resultado de un experimento. Hemos explicado también que el resultado de una experiencia puede ser de tipo cualitativo o cuantitativo. En el segundo capítulo hemos visto que en ciertas situaciones es necesario utilizar cantidades más pequeñas de una determinada sustancia y para lograr preparar esas cantidades se hacen diluciones seriadas de una solución original, una muestra o una solución de stock. En este capítulo elaboraremos una curva de calibración o curva patrón.
¿Qué se entiende por curva de calibración?
Se
trata de una curva de referencia construida con cantidades conocidas de una
sustancia (por ejemplo la albúmina sérica bovina que vimos antes) que se
utiliza para determinar la cantidad de esta sustancia (proteínas) presente en
una muestra incógnita.
En muchas determinaciones se cumple una relación proporcional entre la
magnitud o intensidad de color que da una reacción y la cantidad del reactivo
que la provoca. Por ejemplo: si la presencia de 10 ug de proteínas en una
solución genera la aparición de un color azul pálido cuando es agregada a
una mezcla reactiva, la presencia de 20 ug de proteína dará lugar a que la
solución se torne azul más oscuro y así sucesivamente.
Para realizar la experiencia debemos preparar unas diluciones seriadas de albúmina sérica bovina como las que hicimos antes (será nuestro estándar o patrón) y dispondremos así de por lo menos 5 concentraciones, luego realizaremos la reacción química correspondiente para desarrollar color y mediremos la intensidad de color de cada solución. Por ej., partiendo de una solución madre de 1mg/ml, tendremos 6 tubos así:
La relación entre intensidad de color y concentración de la sustancia (una medida de la cantidad de esa sustancia) es proporcional y así, si se grafica el valor de intensidad de color medido con un aparato adecuado (espectrofotómetro o colorímetro) en función de las concentraciones crecientes de la sustancia se obtiene una recta. Es decir, a mayor cantidad de proteína, mayor cantidad de producto de reacción y por lo tanto, mayor intensidad de color.
Curva de Calibración
Dado que se ha trabajado con datos reales, los gráficos que se obtienen no son tan ideales, pero esta situación no es un obstáculo ya que dentro de ciertos valores es posible trazar la recta más probable que une una serie de puntos, con el uso de los programas de cálculo de las computadoras.
Hay que advertir que una respuesta lineal no se obtiene en todo el rango de concentraciones posibles sino dentro de un conjunto de valores que dependen de numerosos factores dependientes del método de medición. Por otra parte, este tipo de curvas no se limita solamente a la determinación de un elemento o compuesto químico sino que tiene múltiples aplicaciones.