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NIVELES DE EXPRESIÓN DEL GEN EFECTOR NLEB EN CEPAS DE ESCHERICHIA COLI VEROTOXIGÉNICO DE DISTINTO ORIGEN Y SEROTIPO

CADONA, Jimena1 | BURGÁN, Julia2 | BUSTAMANTE, Ana3 | SANSO, Andrea Mariel 4

LAB. DE INMUNOQUÍMICA Y BIOTECNOLOGÍA. CIVETAN, CONICET, FAC. DE CS. VETERINARIAS, UNCPBA, TANDIL 1; LAB. DE INMUNOQUÍMICA Y BIOTECNOLOGÍA. CIVETAN, CONICET, FAC. DE CS. VETERINARIAS, UNCPBA, TANDIL 2; LAB. DE INMUNOQUÍMICA Y BIOTECNOLOGÍA. CIVETAN, CONICET, FAC. DE CS. VETERINARIAS, UNCPBA, TANDIL 3; LAB. DE INMUNOQUÍMICA Y BIOTECNOLOGÍA. CIVETAN, CONICET, FAC. DE CS. VETERINARIAS, UNCPBA, TANDIL 4

Introducción y Objetivos:
Escherichia coli verotoxigénico (VTEC) es un patógeno transmitido por alimentos que coloniza el tracto intestinal de los seres humanos, pudiendo causar síndrome urémico hemolítico (SUH). El diagnóstico de la infección por VTEC se ve obstaculizado por la incapacidad de distinguir entre las cepas que tienen el potencial de causar SUH de aquellas que no. La patogenicidad de las cepas VTEC eae-positivas depende, en gran parte, de la isla de patogenicidad (PAI) LEE, la cual codifica el sistema de secreción de tipo III (SSTIII). Particularmente, nleB es uno de los principales genes efectores del SSTIII, ubicado en otra PAI, OI-122, y propuesto como marcador de virulencia. Teniendo en cuenta el rol que podrían tener estos efectores en la patogenicidad de VTEC, el objetivo de este estudio fue evaluar y comparar los niveles de expresión basal del gen nleB, en aislamientos VTEC de distinto origen y serotipo.
Materiales y Métodos:
Se analizaron 24 cepas VTEC pertenecientes a 10 serotipos (O157:H7 y no-O157) aisladas de diferentes orígenes, seres humanos, bovinos y alimentos. Las cepas se cultivaron en medio DMEM a 37 °C, con CO2 al 5 % hasta una DO600 de 0,6. Luego se realizó la extracción del ARN y se retrotranscribió a ADNc. Los niveles de expresión de nleB se obtuvieron mediante reacciones de cuantificación relativa por qPCR, utilizando SYBR Green. Los valores de fold change se calcularon en base al método ÅÅCT, usando el gen housekeeping tufA como control endógeno, y una cepa VTEC O157:H7 aislada de un niño con SUH como referencia. Las diferencias de expresión entre grupos (origen y serotipo) se compararon mediante análisis de varianza (ANOVA, p-valor <=0,05).
Resultados:
Los resultados mostraron diferentes niveles de expresión entre las cepas estudiadas. La mayoría de los aislamientos presentó niveles de expresión detectables, con excepción de una cepa O128:NM, de origen humano, la cual resultó negativa. Por otro lado, 4 aislamientos de origen humano y bovino (O145:NM, O146:H21 y O157:H7) presentaron niveles de expresión superiores a la cepa control. Contrariamente, dos cepas de origen humano (O121:H19 y O145:NM), y una cepa de alimento (O157:H7), presentaron valores considerablemente inferiores a la cepa control. No se encontraron diferencias significativas en los niveles de expresión asociadas al origen (bovino y humano) ni al serotipo de los aislamientos, pero sí dentro del grupo de cepas aisladas de casos clínicos. Entre ellas, la expresión de nleB resultó significativamente superior en las cepas provenientes de casos de SUH.
Conclusiones:
En conclusión, los niveles de expresión basal del gen nleB en las cepas VTEC estudiadas no presentaron diferencias asociadas al origen o serotipo. Sin embargo, dentro del grupo de aislamientos de origen humano, los niveles de expresión sí fueron diferentes entre cepas SUH y no-SUH, hallazgo que podría resultar importante para identificar cepas VTEC causantes de enfermedad grave.