LORCH, Melani Gisele | VALVERDE, Claudio | AGARAS, Betina
UNIVERSIDAD NACIONAL DE QUILMES - CONICET
Introducción y Objetivos:
Las bacterias del género Pseudomonas son habitantes naturales de los suelos, y diversas especies con preferencia de colonización rizosférica, capacidad de promoción del crecimiento vegetal y biocontrol son interesantes candidatas para el desarrollo de bioinsumos agrícolas. Nuestro laboratorio cuenta con una colección de 20 aislamientos de Pseudomonas ya caracterizados in vitro, en términos de sus propiedades probióticas y antagonismo de hongos fitopatógenos (Agaras et al. 2015, doi: 10.1016/j.biocontrol.2015.07.003). Con el fin de profundizar en el conocimiento de capacidades ligadas a un buen desempeño como bioinsumo, el objetivo de este trabajo fue poner a punto la evaluación de la recuperación en semilla de un subgrupo 6 de aislamientos de diferentes taxones, en condiciones comparables a las de tratamientos con inoculantes a campo.
Materiales y Métodos:
Para ello, en primer lugar, nos dedicamos a obtener derivados estables mediante vehiculización al cromosoma con Tn7 (Lambertsen et al. 2004, doi: 10.1111/j.1462-2920.2004.00605.x) de genes que codifican proteínas fluorescentes y resistencia a antibióticos. A continuación, se comprobó por PCR la inserción sitio-específica del cassette en la región neutral esperada, la conservación de los fenotipos ya caracterizados en cada derivado marcado respecto del salvaje, y la estabilidad de la inserción cromosomal mediante evaluación del % de células resistentes a antibiótico luego de 240 generaciones sin presión de selección. Para evaluar la recuperación de los aislamientos en semillas de maíz (Zea mays), las semillas no estériles se inocularon según la dosis recomendada (7 ml/kg) con una suspensión bacteriana de DO600=1,0, con y sin el agregado de 28,6 % v/v del protector bacteriano Premax® (Rizobacter, Argentina). Inmediatamente luego de la inoculación, se recuperaron las bacterias adheridas y se realizaron recuentos de viables en placa por la técnica de gota en medio selectivo Gould S1, con el antibiótico del cassette Tn7. Las semillas restantes se colocaron en medio selectivo con el antibiótico para corroborar que todas hayan sido inoculadas. Como control positivo y referencia se utilizó la cepa Pseudomonas sp. 1008 presente en el bioinsumo comercial Rizofos® (Rizobacter, Argentina).
Resultados:
Al evaluar el efecto del Premax®, la recuperación de los aislamientos RBAN4, RPAN1, SMMP3 y SPAN5 de las semillas fue mayor en presencia del aditivo (5,0x, 2,5x, 9,5x, 12,4x, respectivamente), al igual que para el control positivo (97,2x) (Kruskal Wallis, p < 0,05). Los aislamientos SVMP4 y SVBP6 mostraron esta tendencia, pero no fue significativa. En todos los casos las semillas incubadas en S1 mostraron estar bacterizadas, excepto para SBVP6 sin Premax® (11 de 16 semillas). RBAN4 y la cepa comercial mostraron los valores más altos de UFC/g recuperadas en presencia del aditivo respecto de la cantidad inoculada (7,88% y 1,71%, respectivamente), e incluso RBAN4 alcanzó una buena recuperación sin Premax® (1,58% contra 0,01% de la cepa comercial). Por otro lado, los valores de UFC recuperadas no correlacionaron significativamente con el número de UFC inoculadas (Spearman, p < 0,05).
Conclusiones:
Estos resultados demuestran el desempeño particular de cada aislamiento, evidenciando factores intrínsecos de cada especie en la adhesión sobre la superficie de la semilla de maíz. Además, corroboramos que el uso del aditivo Premax® mejora la adherencia a la semilla, permitiendo obtener una mayor recuperación en 4 de los 6 aislamientos probados.
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Revista QuímicaViva Número 3, año 18, Diciembre 2019 quimicaviva@qb.fcen.uba.ar |
