TORRES NICOLINI, Andrés1 | PARISE, Alejandro Ruben2 | ALVAREZ, Vera1 | CONSOLO, Veronica Fabiana 3
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN CIENCIA Y TECNOLOGÍA DE MATERIALES (INTEMA- CONICETUNMDP) 1; DEPARTAMENTO DE QUÍMICA, FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES, UNIVERSIDAD NACIONAL DE MAR DEL P 2; INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN BIODIVERSIDAD Y BIOTECNOLOGIA INBIOTEC-CONICET/FIBA 3
Introducción y Objetivos:
Los hongos del género Trichoderma son microorganismos de suelo que se caracterizan por ser agentes de biocontrol, promover el crecimiento vegetal, secretar enzimas y metabolitos secundarios. Recientemente se ha descripto que algunas cepas reducen metales generando nanopartículas. Tanto los metabolitos secundarios como las nanopartículas poseen propiedades químicas y biológicas de interés para aplicaciones médicas, farmacéuticas o agrícolas. La búsqueda de alternativas innovadoras para el control de microorganismos fitopapatógenos es un área que debe ser explorada. El objetivo de este trabajo fue obtener y caracterizar metabolitos secundarios y nanopartículas a partir de una cepa nativa de Trichoderma y evaluar su capacidad de biocontrol.
Materiales y Métodos:
Se cultivó el hongo durante 7 días a 24 ºC en medio líquido y con agitación constante. Posteriormente, se separó la biomasa fúngica y se trabajó con el caldo de cultivo. Para la obtención de metabolitos, el filtrado del cultivo se extrajo con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se desecaron con Na2SO4 y se evaporaron en rotavapor bajo presión reducida a 40 ºC. El residuo obtenido se resuspendió en etil acetato: metanol (10: 1 v/ v) y fue sometido a cromatografía de capa fina en sílica gel utilizando fases móviles de diferente polaridad (hexano, hexano: etil acetato 1:1 y metanol: acetato 10:1). Los compuestos se revelaron por radiación UV. Para la síntesis de nanopartículas, la biomasa fúngica (20 g) fue lavada y transferida a un erlenmeyer con agua estéril durante 24 h a 24 °C con agitación. Se separó la biomasa por filtración y se recogió el filtrado. Las nanopartículas se sintetizaron agitando soluciones de A-gNO-3 (1 y 3 mM) con el filtrado en oscuridad a 40 °C y pHs entre 6 y 11. Las nanopartículas formadas se separaron por centrifugación. Tanto los extractos como las nanopartículas secas se utilizaron para evaluar su efecto de biocontrol sobre los fitopatógenos Alternaria, Cercospora, Dreschleray Pyricularia sp. Para ello éstos hongos fueron crecidos en medio PDA suplementado con 0, 5 1, 5 y 10 % de los extractos y las nanopartículas en experimentos independientes.
Resultados:
El fraccionamiento cromatográfico de los extractos mostró una mezcla de compuestos que deberá ser indentificado. La síntesis óptima de nanopartículas fue con solución 3 mM de A-gNO-3y pH 11, observándose su formación a partir de los 30 min de incubación. El tamaño medio de partículas fue de 150 - 200 nm. El extracto orgánico incorporado al medio de cultivo en concentraciones del 5-10% inhibió el crecimiento los cuatro patógenos ensayados entre 10-30%. De la misma manera, se redujo el crecimiento de éstos hongos entre 20-30% en el medio de cultivo suplementado con 1% de nanopartículas. Ninguno de los compuestos mostró toxicidad para la cepa de Trichoderma.
Conclusiones:
Estos resultados apuntan al desarrollo de formulaciones de agroinsumos tecnológicamente novedosas para el control de enfermedades fúngicas.
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Revista QuímicaViva Número 3, año 18, Diciembre 2019 quimicaviva@qb.fcen.uba.ar |
