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DIFERENCIACION DE CÉLULAS THP-1 INDUCIDA POR BIFIDOBACTERIAS

ASSAD, Sabrina1 | MINNAARD, Jessica 2 | PÉREZ, Pablo Fernando2

CENTRO DE INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO EN CRIOTECNOLOGÍA DE ALIMENTOS (CONICET-LA PLATA) 1; CIDCA (CONICET, CICPBA Y UNLP) / CÁTEDRA DE MICROBIOLOGIA GENERAL (FCE, UNLP) 2

Introducción y Objetivos:
Los probióticos modulan la respuesta inmune del huésped. Las cepas de Bifidobacterium utilizadas en este trabajo han demostrado estimular diferencialmente la fagocitosis y expresión de HLADR y TLR2 en células THP1 diferenciadas con acetato de forbol miristato (PMA) (THP1PMA). El objetivo de este trabajo fue caracterizar las células estimuladas con bifidobacterias a través del estudio de la expresión de marcadores de superficie.
Materiales y Métodos:
Se utilizaron dos cepas: B bifidum CIDCA 5310 y B adolescentis CIDCA 5317 crecidas en anaerobiosis (MRS, 24 h,37°C) y monocitos en cultivo THP1 diferenciados durante 48 hs con PMA 200 nM. Luego, en las mismas condiciones de cultivo, las células se estimularon 18 hs con cada una de las cepas en una multiplicidad de infección de 10, y LPS 0,5 μg/ml e IFN gamma 7500 U/ml, o IL-4 para realizar la marcación con anticuerpos anti CD16, CD64, CD163 o CD206. La expresión se evaluó por citometría de flujo y se calculó el índice de fluorescencia media (IFM)= Porcentaje de células positivas (FITC o PE) x media de intensidad de fluorescencia. Se incluyeron los controles de isotipo y el basal.
Resultados:
Los resultados obtenidos en las células THP1PMA estimuladas con IFN gamma y LPS y la cepa CIDCA 5310 mostraron un aumento del valor de IFM para la expresión de CD16 (10795,03 ± 863,27, P< 0,05) respecto al control sin bacteria (5457,87 ± 400,18); cuando se evaluó CD64 ambas cepas disminuyeron los valores de IFM respecto al control (3532,04 ± 14,42), con valores de 2455,04 ± 222,94 para la cepa CIDCA 5317 (P< 0,05) y 2511,02 ± 378,00 para la cepa CIDCA 5310 (P=0,06). Para este último marcador, en ausencia de la diferenciación previa con PMA, no se encontraron diferencias entre el control de IFN gamma + LPS (7511,72 ± 1092,05) y la estimulación con la cepa CIDCA 5310 (6820,32 ± 345,28) o la cepa CIDCA 5317 (7665,94 ± 68,19). Cuando las células THP1PMA se estimularon con IL-4, el valor de IFM para CD163 fue de 3982,77 ± 153,01 y para CD206 fue de 265,78 ± 83,73. El estímulo con la cepa CIDCA 5310 produjo un aumento de los valores de IFM (P < 0,05) (4740,94 ± 272,40 y 799,17 ± 96,78, respectivamente para cada marcador). La cepa CIDCA 5317 mostró el mismo comportamiento (4613,41 ± 285,38, P<0,05 y 414,17 ± 54,18, respectivamente para CD163 y CD206). Cuando se evaluó CD206 en ausencia de diferenciación con PMA, sólo la cepa CIDCA 5310 aumentó la expresión (2921,89 ± 32,00, P<0,05) respecto al control sin cepa (1630,85 ± 29,48).
Conclusiones:
Los resultados muestran un perfil de diferenciación de las células THP1 dependiente de la cepa: CIDCA 5310 potencia la expresión de marcadores M1 y M2 mientras que la cepa CIDCA 5317 sólo potencia la expresión de marcadores M2.