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CARACTERIZACIÓN TAXONÓMICA DE PSEUDONOCARDIA SP. MITI 22T, ACTINOBACTERIA ENDOLIQUÉNICA

DEPTO. BOTÁNICA, CENTRO REGIONAL UNIVERSITARIO BARILOCHE-UNCOMAHUE-INIBIOMA, CONICET 1; DSMZ – DEUTSCHE SAMMLUNG VON MIKROORGANISMEN UND ZELLKULTUREN GMBH, INHOFFENSTRASSE 7B 2

Introducción y Objetivos:
Investigaciones recientes han demostrado que los líquenes (hongos liquenizados), los que constituyen una asociación simbiótica entre un hongo y un alga y/o cianobacteria, podrían ser una fuente de microorganismos biotecnológicamente interesantes, incluidas las actinobacterias. Estudios realizados sobre microecosistemas liquenizados en la región andina (Patagonia, Argentina), mostraron el aislamiento de veintitrés cepas de actinobacterias, pertenecientes a diversos géneros, provenientes del liquen Pseudocyphellaria berberina (Ascomycota). El objetivo de este trabajo fue complementar estos estudios mediante un enfoque polifásico (caracterización morfo-fisiológica, química y molecular) con el fin de describir una posible especie nueva representada por la cepa endoliquénica MITI 22T.
Materiales y Métodos:
Esta cepa fue cultivada en condiciones aeróbicas a temperatura ambiente en medios de cultivo para actinobacterias saprófitas. Una suspensión de esporas de MITI 22T se conservó en glicerol (20%, v/v, -20°C) (BCRU, UNComahue), designada por DSMZ como DSM 46833T. El ADN genómico total (DSM 46833T) se extrajo utilizando el kit de aislamiento Ultraclean Microbial. Para comparar las secuencias incompletas del gen 16S ARNr de la cepa DSM 46833T con las de las especies tipo (NCBI) se utilizó el análisis BLAST. Árboles filogenéticos fueron reconstruidos utilizando los métodos Neighbour-Joining (NJ), Máxima Verosimilitud (ML) y Máxima Parsimonia (MP), utilizando el programa MEGA 7.0. La preparación de la muestra para el análisis de proteína mediante espectrometría de masas de desorción/ionización con láser asistida por matriz (MALDI-TOF MS) se realizó de acuerdo con el protocolo de extracción de etanol/ácido fórmico. A partir de hidrolizados de células completas (HCl 4N, 100°C, 16 h) se determinó el ácido diaminopimélico de la pared celular y los azúcares. Los ácidos grasos celulares se extrajeron de células cultivadas en agar soja (28°C, 22 días). Los lípidos polares se extrajeron y separaron mediante TLC bidimensional. Se estudiaron las características fenotípicas de la cepa DSM 46833T en comparación con las cepas tipo de especies filogenéticas relacionadas.
Resultados:
El aislamiento MITI 22T (DSM 46833T) creció con 1% (p/v) NaCl, pH 5.0-7.0 y 28°C (crecimiento óptimo). Un análisis comparativo de la secuencia del gen 16S ARNr mostró que la cepa DSM 46833T formó un grupo distinto con Pseudonocardia xinjiangensis XJ-45T (98.9%) y Pseudonocardia saturnea DSM 43195T (98.3%). El ADN genómico (DSM 46833T) tenía un valor de G+C (73.7% en moles). La similitud ADNADN entre DSM 46833T y su vecino filogenético más cercano, P. xinjiangensis (menos del 17%), en combinación con la diferenciación de las cepas tipo relacionadas de Pseudonocardia por MALDI-TOF, sugiere que la cepa DSM 46833T representaría una especie nueva incluida en el género Pseudonocardia.
Conclusiones:
El enfoque polifásico del aislamiento fue consistente con la afiliación al mencionado género.