QuímicaViva - Ver resumen

IDENTIFICACIÓN DE CEPAS DE TRICHODERMA ENDÓFITAS DE YERBA MATE MEDIANTE TAXONOMÍA CLÁSICA Y MARCADORES MOLECULARES ITS1-5,8S-ITS2 Y EF- 1ALFA

VERESCHUK, Manuela Lizz | LOPEZ, Ana Clara | ALVARENGA, Adriana Elizabet | VILLALBA, Laura Lidia | ZAPATA, Pedro Dario

LAB. BIOTECNOLOGIA MOLECULAR-INBIOMIS-FCEQYN-UNAM

Introducción y Objetivos:
La provincia de Misiones (Argentina), cuenta con características y condiciones agroecológicas aptas para el cultivo y desarrollo de la yerba mate Ilex paraguariensis St. Hil. En Misiones, la yerba mate es desarrollada en monocultivos, y presenta una gran importancia económica. Con un área cultivada de 144.118,220 hectáreas, la provincia generó una producción de 127.595.538 kilogramos de hoja verde en el período enero-marzo de 2019, en comparación a los 22.115.999 kilogramos de hoja verde producidos en el mismo período, en la provincia de Corrientes. Sin embargo, es preocupante el incremento de yerbales degradados y de problemas fitosanitarios en Misiones. Se han realizado numerosos estudios para mejorar la calidad y fertilidad de los suelos de los yerbales; y se han encontrado hongos asociados a las plantas de yerba mate en estado nativo. Sin embargo, no se ha profundizado en los aspectos de la biología del suelo relacionados con el estudio de los microorganismos que ejercen efectos benéficos sobre las plantas. Los hongos del género Trichoderma presentan capacidades de biocontrol contra hongos fitopatógenos; además de aportar otros beneficios a las plantas, como la producción de metabolitos y enzimas, la liberación de nutrientes y factores de crecimiento. De modo que la aplicación directa de cepas autóctonas de Trichoderma sobre el sustrato de germinación constituye una alternativa prometedora para combatir los problemas existentes en los yerbales. Por todo lo anteriormente mencionado, se estableció como objetivo general de este trabajo identificar morfológica y molecularmente 14 aislados de Trichoderma endófitos de plantas de yerba mate de la Provincia de Misiones.
Materiales y Métodos:
En primer lugar, se registraron las características macroscópicas de las colonias fúngicas. Luego se realizaron observaciones microscópicas mediante tinción simple con azul de lactofenol, y con la ayuda de claves taxonómicas, se observaron las características de las estructuras reproductivas. Para la identificación molecular, en primer lugar se realizó la extracción de ADN, el cual se cuantificó y se comprobó su pureza y calidad. La identificación molecular de los aislados se llevó a cabo utilizando dos marcadores moleculares: un fragmento de ~650 pares de bases, perteneciente a los espaciadores transcriptos intergénicos ITS1 e ITS2, junto con el gen 5,8S del ADNr (ITS1-5,8S-ITS2); y un fragmento de ~700 pb perteneciente a la secuencia parcial del factor de elongación (EF-1ALFA). Las secuencias obtenidas se compararon mediante un análisis de identidad/similitud, y se analizaron mediante el paquete informático Mega 7, utilizando el método de distancias de Neighbour joining junto al modelo de Jukes – Cantor, con un bootstrap de 1000 réplicas.
Resultados:
De esta manera se lograron agrupar 14 aislados fúngicos endófitos de yerba mate dentro de cinco especies pertenecientes al género Trichoderma: T. asperelloides, T. asperellum, T. hamatum, T. reesei, y T. strigosellum.
Conclusiones:
Mediante la caracterización macro y microscópica de los aislamientos y la utilización de marcadores moleculares se obtuvo una identificación más precisa de las cepas estudiadas.