ORTELLADO, Laura Ester | LISOWIEC, Leandro Antonio | FONSECA, Maria Isabel | ZAPATA, Pedro Darío
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA MOLECULAR – INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA MISIONES – UNIVERSIDAD NACIONAL
Introducción y Objetivos:
Los daños que ocasionan los lípidos y carbohidratos generados por la industria alimentaria al medio ambiente son ampliamente conocidos. Las lipasas son enzimas capaces de modificar los aceites a través de la reacción de hidrólisis; rompiendo el enlace éster del triglicérido en presencia de agua produciendo glicerol y ácidos grasos. La aplicación de enzimas puede llegar a resolver los problemas en los procesos de tratamiento biológico de aguas residuales con un alto contenido de grasa y sólidos en suspensión. Los hongos presentan una amplia capacidad degradativa produciendo lipasas como parte de su metabolismo. Estudios previos de este grupo de trabajo han logrado evidenciar que la cepa LBM081 presenta un gran potencial lipolítico por lo cual su identificación a nivel específico se vuelve crucial, en vistas a potenciales aplicaciones en biotecnología. Es por ello que el objetivo de este trabajo fue identificar la cepa fúngica del género Penicillium LBM081 nativa de la Provincia de Misiones empleando diferentes marcadores moleculares para ello.
Materiales y Métodos:
La cepa que se utilizó de Penicillium sp. está disponible en el cepario del Laboratorio de Biotecnología Molecular (Instituto de Biotecnología Misiones). Para la identificación de la cepa seleccionada, se realizó una extracción de ADN a partir de micelio obtenido de cultivos de 7 días en medio líquido YES (Extracto de levadura 5 g/L; Glucosa 30 g/L) utilizando el protocolo propuesto por Fonseca et al (2013). La calidad del ADN se verificó mediante la visualización en geles de agarosa 1 % (p/v) teñidos con gel red. Para la identificación de la cepa se utilizaron los cebadores ITS1-ITS4, Bt2a-Bt2b y RPB2-5-RPB2-7R. Se realizó una PCR a partir de 60ng de ADN como molde. Una reacción sin el agregado de ADN se utilizó como control negativo. Los productos de las PCR se corrieron en un gel de agarosa 2% y se tiñó con gel red. Los productos se secuenciaron y se emplearon para realizar una búsqueda de secuencias homólogas del reino Fungi mediante el programa BLASTN. Se recuperaron las primeras 100 secuencias de especies tipo relacionadas y de ese conjunto de secuencias se eliminaron las secuencias redundantes. Para realizar el alineamiento se tomaron las primeras 43 secuencias y se llevó a cabo el alineamiento con el programa MUSCLE.
Resultados:
El dendrograma concatenado se llevó a cabo mediante el programa MEGA 6.0 a partir de secuencias de ITS; BenA y RPB-2 utilizando el método de NEIGHBOR JOINING (NJ) con un boostrap de 1000 repeticiones. Se corroboró la pertenencia al género Penicillium de los aislamientos LBM081 al observar a nivel macro y microscópico la presencia de conidios, metúlas y fiálides. Las estructuras observadas micro y macroscópicas fueron las estructuras típicas del género Penicillium. Del análisis bioinformático de las secuencias obtenidas y la construcción de un árbol concatenado se obtuvo que el aislamiento LBM 081 se agrupó en un clado con P. rubens con un 96% de identidad.
Conclusiones:
Los resultados indican que el aislamiento LBM 081 se corresponde con P. rubens
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Revista QuímicaViva Número 3, año 18, Diciembre 2019 quimicaviva@qb.fcen.uba.ar |
