JUAREZ, Guillermo Esteban | GALVAN, Estela Mari
CONICET - CEBBAD, UNIVERSIDAD MAIMÓNIDES, LAB. PATOGÉNESIS BACTERIANA
Introducción y Objetivos:
Las infecciones polimicrobianas pueden dar lugar a interacciones inter-especies que alteren el establecimiento, progresión y severidad del cuadro clínico. Dentro de las infecciones nosocomiales más comunes se encuentran las infecciones urinarias asociadas a catéter (IUAC), que frecuentemente son de carácter polimicrobiano. Previamente, en nuestro laboratorio se estudió el desarrollo de co-cultivos de cepas de Klebsiella pneumoniae(Kp) y Proteus mirabilis (Pm) aisladas de un paciente con IUAC en medio de orina artificial (MOA), y se describió que Kp sufre una pérdida de viabilidad tanto en co-cultivos planctónicos como en biofilms mixtos. La generación de compuestos volátiles (PmV) por parte de Pm, entre ellos amoníaco, podrían estar involucrados en el efecto bactericida. El objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad de los PmV para afectar la viabilidad de Kp en cultivos planctónicos y biofilms. Además el estudio se extendió a otras especies aisladas de IUAC.
Materiales y Métodos:
Se ensayaron diferentes sistemas de cultivo en MOA a 37°C, en donde Pm y Kp fueron inoculados en compartimentos que no permitieron el contacto físico entre células de diferentes especies, pero con un espacio aéreo en común. Cultivos de Kp en medio líquido, en superficie de medio sólido agar 1,5%, o bien, biofilms desarrollados durante 3 d sobre placas de poliestireno se expusieron a PmV generados por Pm en su vecindad. A distintos tiempos se determinó el número de UFC por el método de diluciones seriadas y posterior siembra en placas de LB (Kp) y LB con bajo sodio (Pm). También se evaluó el efecto sobre la biomasa de los biofilms mediante la técnica de cristal violeta.
Resultados:
Los resultados mostraron que cultivos planctónicos de Kp sufrieron una pérdida de viabilidad de 3 logs luego de 18 h de exposición a PmV, en comparación con el control, siendo Kp indetectable a las 24 h. Cuando se sembraron gotas de Kp conteniendo 105 células en MOA agar y se incubaron por 48 h en presencia de PmV se detectó una reducción de la viabilidad de 4 logs. Tamponando el MOA a pH 6,5 con PIPES 0,1 M se observó un aumento de 1 log en el crecimiento de Kp control (sin PmV) y una reducción de sólo 1 log cuando se expuso a PmV. Por otra parte, la exposición de cultivos de Escherichia coli, Enterococcus faecalis y Morganella morganii a PmV durante 48 h redujo drásticamente la viabilidad de E. coli y M. morganii, pero no afectó a E. faecalis. Biofilms preformados de Kp expuestos a PmV mostraron disminución tanto el número de células viables (caída de 3 logs) como en la biomasa del biofilm (reducción del 41 ± 19%), comparados con los respectivos controles sin tratar.
Conclusiones:
Estos resultados sugieren que los compuestos volátiles producidos por P. mirabilis en MOA tienen un alto poder bactericida sobre bacterias gram negativas uropatógenas, incluso cuando éstas se encuentran formando estructuras de resistencia como lo son los biofilms.
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Revista QuímicaViva Número 3, año 18, Diciembre 2019 quimicaviva@qb.fcen.uba.ar |
