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APORTES EN LA ELUCIDACIÓN DE LA RESPUESTA PROMOVIDA PORGLUCONACETOBACTER DIAZOTROPHICUS COMO BIOCONTROLADOR DE RALSTONIASOLANACEARUM GMI1000

FARMACOBOTÁNICA, ÁREA BIOLOGÍA VEGETAL-CONICET, FACULTAD DE CS BIOQUÍMICAS YFARMACÉUTICAS, UNR 1; INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO (IBR-CONICET,FCBYF, UNR)

Introducción y Objetivos:
Gluconacetobacter diazotrophicus (Gd) es una bacteria endófita promotora delcrecimiento vegetal (PGPBEs). La asociación planta-PGPBE beneficia a la planta hospedadora mediante lafitoestimulación, biofertilización y protección contra patógenos. Ralstonia solanacearum (Rso) es la bacteriaresponsable de la marchitez bacteriana en tomate, y causa enormes pérdidas económicas. El objetivo de estetrabajo fue estudiar la acción de GdPAL5 como agente de biocontrol evaluando los mecanismos antagónicos deesta bacteria durante el estrés biótico producido por Rso GMI1000.
Materiales y Métodos:
La motilidad bacteriana es de importancia en el proceso de colonización de la plantapor parte del endófito, por eso se ensayaron las motilidades tipo swimming, swarmming y twiching en placas dePetri con medio LGI-P con concentraciones diferentes de agar y se observó la migración de las bacterias y lamorfología de los bordes de las colonias. Los ensayos de biocontrol se realizaron mediante estudios in vivo e invitro. Plantas de Arabidopsis thaliana Col0 se inocularon con 106 UFC/mL de Gd, luego de 3 semanas, seinocularon por raíz con 106 UFC/mL de Rso. Luego de 12 días: I- Las plantas se esterilizaron superficialmente yextractos de los distintos órganos se sembraron en medios selectivos para cada bacteria. II- Se tomaronmuestras a distintos días post inoculación con Gd y Rso, se fijaron en FAA, cortaron y tiñeron con safranina-fastgreen y azul de toluidina (1%). III- Se cuantificó colorimétricamente el contenido de clorofila a y clorofila b enhojas de plantas sometidas a distintos tratamientos. Además, se buscaron posibles compuestos antimicrobianosmediante experimentos in vitro ensayando la actividad antibacteriana de fracciones de cultivo de la bacteriaendófita (medio extracelular, contenido celular y cultivo bacteriano), con la técnica de superposición con softagar.
Resultados:
Bajo las condiciones ensayadas Gd presentó motilidad tipo swarming, que le permite unamigración rápida y coordinada, que junto a la producción de exopolisacáridos juegan un rol sustancial en lainteracción con la planta. Los ensayos de biocontrol in vivo muestran: a) estructuras anatómicas del tallo másconservadas en plantas con Gd evidenciándose aumento de xilema, mayor lignificación y mayor cantidad detejido esclerosado entre los haces vasculares; b) técnicas histoanatómicas y los resultados de recuentosbacterianos revelaron mayor proliferación del fitopatógeno en plantas no tratadas con Gd; c) A su vez, seobservó una concentración menor de pigmentos en plantas no inoculadas con Gd. En los ensayos in vitro seevidenció actividad antagonista de la fracción celular del cultivo de Gd contra Rso.
Conclusiones:
Los resultados del presente trabajo muestran que Gd coloniza las plantas de A.thaliana ejerciendo un rol protector frente a Rso.