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CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA Y GENÉTICA DEL ANTAGONISMO ANTE ELHONGO FITOPATÓGENO MACROPHOMINA PHASEOLINA, EN EL AISLAMIENTO NATIVOSVBP6 PERTENECIENTE A LA NUEVA ESPECIE PSEUDOMONAS DONGHUENSIS

MUZIO, Federico Matías | AGARAS, Betina | VALVERDE, Claudio

UNIVERSIDAD NACIONAL DE QUILMES - CONICET

sólida estrategia a la hora de mejorar la productividad agrícola de la región y disminuir el impacto ecológicodebido al uso de pesticidas. En esta línea, nuestro laboratorio obtuvo una colección de aislamientos bacterianosdel género Pseudomonas provenientes de lotes agrícolas de la región. Entre ellos se destaca el aislamientoSVBP6, perteneciente a la especie Pseudomonas donghuensis, por su amplio espectro de antagonismo fúngico.Sin embargo, el genoma de SVBP6 carece de los determinantes genéticos asociados al control biológico deotras especies de Pseudomonas, como los clusters génicos para la producción de diacetilfluoroglucinol,fenazinas o lipopéptidos (Agaras et al 2018, doi:10.1016/j.apsoil.2011.11.016). Esto vuelve a SVBP6 uncandidato interesante para la identificación de nuevas moléculas o mecanismos intervinientes en elantagonismo de hongos fitopatógenos en el suelo. El objetivo de este trabajo ha sido caracterizar fisiológica ygenéticamente la producción del/de los factor/es determinantes del antagonismo fúngico en SVBP6.
Materiales y Métodos:
Mediante mutagénesis al azar mediada por transposón Tn5 se obtuvo una colección deaproximadamente 60 mutantes de la cepa SVBP6, seleccionados a partir de la pérdida de capacidad antagonistafrente al hongo fitopatógeno Macrophomina phaseolina 131.2010. Llamativamente, se detectaron 6 insercioneslocalizadas en un mismo clúster génico, cuya región homóloga ha sido descripta en el aislamiento P.donghuensis HYS como relacionado a la biosíntesis de 7-hidroxitropolona (7-HT) (Chen et al 2018,doi:10.1128/JB.00087-1). Con estos mutantes y la versión salvaje, se realizaron cultivos líquidos en medioKing‟s B, cuyo espectro de absorbancia UV-visible fue analizado. El sobrenadante del cultivo fue utilizado pararealizar extracciones en acetato de etilo y ensayos de antagonismo vs M. phaseolina 131.2010, adicionando elsobrenadante y/o extracto a agar papa dextrosa.
Resultados:
Constatamos que el sobrenadante libre de células de SVBP6 en fase exponencial tardía retiene laactividad antagonista de hongos y posee picos de absorción UV compatibles con los de 7-HT, en contraste atodos los mutantes Tn5 del cluster identificado, los cuales revelaron una marcada reducción de los picos UVcorrespondientes, sugiriendo una asociación entre los genes interrumpidos en los mutantes, el antagonismoa M. phaseolina y la producción de 7-HT por parte de SVBP6. La producción de al menos un compuestocompatible con 7-HT se activa en fase exponencial media en medio King‟s B, alcanzando un máximo en la faseexponencial tardía. Se logró extraer la actividad antagonista y su patrón de absorción UV, siendo este extractocapaz de restaurar el antagonismo en un sobrenadante de un mutante Tn5 incapaz de producir 7-HT. Lacapacidad del extracto conteniendo 7-HT de disminuir el crecimiento de M. phaseolina resultó directamenteproporcional a la dosis ensayada.
Conclusiones:
Los resultados obtenidos indican que el aislamiento P. donghuensis SVBP6 produce al menosuna molécula relacionada a 7-HT, que es un factor preponderante del antagonismo in vitro ante M. phaseolina,lo cual podría replicarse en el antagonismo por parte de SVBP6 a otros hongos fitopatógenos.