CHELALICHE, Anibal Sebastian | ALVARENGA, Adriana Elizabet | ZAPATA, Pedro Dario | FONSECA, MariaIsabel
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA MISIONES
Introducción y Objetivos:
Los bifenilospoliclorados (PCBs) son compuestos químicos compuestos de unamolécula de bifenilo con 1 a 10 sustituciones de cloro. Estos compuestos fueron ampliamente utilizados en elámbito industrial desde 1930. Como consecuencia de su uso, grandes cantidades de PCBs han sido distribuidosen el ambiente lo que representa una amenaza para el ecosistema. Los hongos de pudrición blanca, han sidoampliamente utilizados en procesos de remediación para degradar varios congéneres de PCBs. Elbasidiomycete Pleurotus sajor-caju ha demostrado una excelente resistencia a los Aroclores 1242, 1254 y1260; y una alta tasa de remoción de los mismos en medio líquido, llegando a obtenerse porcentajes deremoción de hasta 98%. Aunque la capacidad de los hongos de pudrición blanca para remover xenobióticos hasido ampliamente documentada existe poco conocimiento acerca de las enzimas ocupadas por el hongo parapoder degradarlos. En este estudio, se analizaron comparativamente los proteomas de la cepa de P. sajorcajuLBM105 en medios de cultivo líquidos deficiente de nitrógeno tanto en presencia como en ausencia de losaroclores 1242, 1254 y 1260, buscando encontrar las posibles enzimas involucradas para remover estoscompuestos contaminantes.
Materiales y Métodos:
Para la obtención de las proteínas abundantes durante la degradación de los PCBs seprocedió a incubar 20 ml de medio de cultivo sintético líquido deficiente en nitrógeno de glucosa-asparaginasuplementado con una solución de 200 ppm de PCBs conteniendo una mezcla de los Aroclores 1242, 1254 y1260. Paralelamente se evaluó la situación control sin el agregado de la solución de PCBs. El micelio fúngicoobtenido de P. sajor-cajuobtenido que fue expuesto a los bifenilospoliclorados fue lavado mediante 3 lavadoscon acetona. La ruptura celular se realizó mediante la utilización de nitrógeno líquido en presencia de buffer deextracción. El extracto obtenido fue reducido, alquiladoy precipitado. Las proteínas obtenidas fueron tratadascon Tripsina y analizadas por nanoHPLC acoplado a un espectrómetro de masas Q-Exactive.
Resultados:
De las proteínas identificadas que se mostraban significativamente sobre-expresadas se destacala presencia de reductasas de cadena corta, aldo-ceto reductasas, galactosa oxidasas, peroxidasas, lacasas ycarboxilesterasas. En cambio, se observó una disminución en la expresión de oxilipinas, piruvato carboxilasas ychaperonas (Hsp70, DnaJ, Hsp90).
Conclusiones:
Los perfiles de expresión de estas proteínas evidencian la presencia de procesos oxidativosrelacionados con modificaciones en la estructura de los PCBs, posiblemente involucrando la dehalogenación desus anillos mediada por especies reactivas del oxígeno y la reducción de sus metabolitos de degradación y delestrés oxidativo sufrido por los mismos evidenciada por la disminución de expresión de proteínas involucradasen el metabolismo del carbono y de los lípidos, que además parece afectar a la expresión de varias chaperonas
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Revista QuímicaViva Número 3, año 18, Diciembre 2019 quimicaviva@qb.fcen.uba.ar |
