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EVALUACIÓN DE LA VARIACIÓN EN LA EXPRESIÓN DE FACTORES DE VIRULENCIA IMPLICADOS EN LA PATOGENICIDAD DE YERSINIA ENTEROCOLITICA TRATADAS CON NANOPARTICULAS DE PLATA

TORANZO, Araceli 1 | PAEZ, Paulina2 | LUCERO ESTRADA, Cecilia3

MIBIO - CONICET 1; DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FAMACÉUTICAS. FCQ. UNIVERSIDAD NACIONAL DE CÓRDOBA / UNITEFA - CONICET 2; ÁREA DE MICROBIOLOGÍA. FQBYF. UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN LUIS. / IMIBIO - CONICET 3

Introducción y Objetivos:
Yersinia enterocolitica está ampliamente distribuida en el medio ambiente y en las poblaciones animales, lo que representa una fuente potencial de infección para los humanos. El principal reservorio de cepas patógenas para humanos es el cerdo. De entre los 6 biotipos conocidos, las cepas que pertenecen a los biotipos 1B y 2 a 5 son patógenas para animales y humanos. A pesar de no poseer los marcadores de virulencia tradicionales, cepas del biotipo 1A han sido aisladas como único agente causal de infecciones gastrotintestinales. La patogenicidad de Y. enterocolitica depende de la presencia de varios factores de virulencia que facilitan que las bacterias ingresen a un organismo susceptible, lo colonicen, evadan el sistema inmunológico y crezcan en condiciones desfavorables. Previamente, observamos que nanopartículas de plata (NPsAg) fitosintetizadas con extracto acuoso de Bothriochloa laguroides tuvieron actividad antibacteriana y antibiofilm contra cepas de Y. enterocolitica. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue determinar si existe variación en la expresión de genes de virulencia.
Materiales y Métodos:
. Se utilizaron dos cepas de diferentes bio/serotipos: Y. enterocolitica 1B/O:8 (8081) e Y. enterocolitica 1A/O:5 (ME110). Los genes analizados para la cepa 8081 fueron virF ,ail ,inv , yenI e yst, mientras que para la cepa ME110 fueron yenI e yst debido a que los demás genes no se encuentran en esta cepa.Las cepas se hicieron crecer en caldo tripticasa soja adicionado con 0,25% de glucosa (CTSG) por 24 h a 25 °C con una dilución 1/256 de NPsAg, luego se procedió a realizar la extracción de ARN con Trizol. Se extrajo el ARN tanto de células planctónicas como sésiles. El ARN fue cuantificado a 260/280 nm. La síntesis de ADNc se llevó a cabo con 200 U/μl de la enzima retrotranscriptasa M-MLV.Para realizar la cuantificación relativa, la expresión de los genes fue normalizada con el gen constitutivo 16S ARNr usando el software ImageJ 1.5.
Resultados:
Con la cepa 8081 se observó una disminución en la expresión del gen inv (que codifica para la proteína invasina, la cual promueve la adhesión) en células sésiles tratadas con NPsAg. Con la cepa ME110 no se observó variación en la expresión de los genes estudiados luego del tratamiento.
Conclusiones:
La disminución de la capacidad de formar biofilms de la cepa 8081 luego del tratamiento con NPsAg podría deberse a una disminución en la expresión de invasina, con la consiguiente disminución en la adhesión de las células