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ACTIVIDAD PROTEOLÍTICA DE STENOTROPHOMONA MALTOPHILIA AISLADA DEL INTESTINO DE ANTICARSIA GEMMATALIS

GALELLI, Mirta Esther | MIYAZAKI, Silvia Susana

ÁREA DE AGROALIMENTOS, FACULTAD DE AGRONOMÍA, UBA

intestinal y sus posibles efectos sobre los insectos. La alimentación y las condiciones fisiológicas de los insectos pueden variar la flora microbiana intestinal. El cambio climático está causando un aumento de la temperatura global, incrementando las zonas de cultivo afectadas por plagas. Los insectos no regulan su temperatura interna, por lo que el cambio climático podría favorecer el crecimiento de la microflora intestinal, acentuando la relevancia del estudio del efecto de la flora microbiana intestinal en el desarrollo del insecto. Las larvas del Lepidóptero Anticarsia gemmatalis consumen hojas y/o perforan las vainas de la soja (Glycine max), destruyendo uno de los cultivos más importantes de la Argentina. Stenotrophomonas maltophilia es un bacilo Gram negativo ampliamente distribuido en el medio ambiente. El objetivo de este trabajo fue caracterizar las propiedades de las proteasas de S. maltophilia aislada del intestino de Anticarsia gemmatalis.
Materiales y Métodos:
La bacteria se aisló de intestinos del quinto estadio de Anticarsia gemmatalis alimentada con dieta INTA. Se identificó con API 20NE. El crecimiento se estudió en medios nitrogenados complejos agarizados: 5 % de: caseína; caseinato de calcio; harina, proteína y tripteína de soja, peptona de carne y 12% de gelatina. Los aminoácidos se determinaron por cromatografía en capa delgada. Se realizaron antibiogramas. El amoníaco se determinó por microdifusión (adsorbente: MgCl2). La actividad proteolítica se determinó con azocaseína. Se estudió el efecto del inhibidor de proteasas de Kunitz (0,3; 1,5 y 3 μM). Las electroforesis fueron PAGE 8 % y los zimogramas con caseína copolimerizada (1 mg/ml). Se tiñó con Coomassie blue. El efecto del inhibidor de proteasas PMSF se determinó usando zimogramas.
Resultados:
S. maltophilia aislada fue capaz de crecer en medios nitrogenados complejos, alcalinizándolos. Los aminoácidos liberados dependieron del medio. La actividad proteolítica sobre azocaseína fue máxima a las 46 h de cultivo (10,8 U/DO660), liberando amoníaco (0,3 μg/DO660). Fue sensible a estreptomicina, pero no a cefalexina, ampicilina, cloranfenicol, eritromicina, gentamicina y penicilina. El efecto del inhibidor de Kunitz en medio líquido con caseína fue una disminución del crecimiento en un 50 % a las 18 h de cultivo, a tiempos mayores su efecto fue menor; esto podría ser debido a la síntesis de proteasas no inhibidas por Kunitz. Con zimogramas de los intestinos de Anticarsia y de un cultivo de S. maltophilia se observó un patrón similar de actividad proteolítica a altos pesos moleculares, mayores a 140 kDa. Las bandas proteolíticas bacterianas fueron inhibidas por PMSF, sugiriendo proteasas del tipo serina.
Conclusiones:
S. maltophilia por su actividad proteolítica y su capacidad de colonizar los intestinos de Anticarsia gemmatalis podría incrementar el metabolismo proteico intestinal de las larvas, favoreciendo su crecimiento.