MORELLATO, Agustín Ezequiel 1 | WALL, Luis2 | AGARAS, Betina2
UNIVERSIDAD NACIONAL DE QUILMES 1; UNIVERSIDAD NACIONAL DE QUILMES - CONICET 2
Introducción y Objetivos:
Los efectos benéficos de los inoculantes microbianos probióticos sobre plantas son conocidos, pero aún no se ha estudiado en detalle sus dinámicas de crecimiento, persistencia y efectos microambientales en el suelo. El inoculante Rizofos® (Rizobacter Argentina S.A.) está basado en la cepa Pseudomonas sp. 1008 y se comercializa para favorecer la disponibilidad de fósforo en gramíneas. Con este producto como modelo, nos propusimos obtener una variante marcada y caracterizarla fenotípicamente para realizar ensayos en invernáculo y analizar su trazabilidad en distintas porciones del sistema suelo-raíz.
Materiales y Métodos:
En la caracterización fenotípica, se cuantificaron in vitro la producción de fosfolipasas (agar yema de huevo, AYH), exoproteasas (agar leche, AL) y la solubilización de fosfatos inorgánicos (agar NBRIP), y se evaluó la producción de ácido cianhídrico (HCN) y la susceptibilidad a los antibióticos kanamicina, gentamicina y cloranfenicol. La variante marcada (1008-VM) se obtuvo por conjugación tetraparental (Lambertsen et al. 2004, doi: 10.1111/j.1462-2920.2004.00605.x), incorporando un cassette que expresa la proteína fluorescente YFP y resistencias a estreptomicina (Str) y kanamicina (Km). Se realizó un ensayo en invernáculo en macetas de 1l con mezcla suelo:perlita, plantas de trigo y 1 mes de duración. Los tratamientos fueron 4: A) trigo sin inoculación; B) trigo inoculado en semilla; C) trigo inoculado en sustrato; D) sin planta, sustrato inoculado. El seguimiento de 1008-VM en las muestras de raíces, suelo rizosférico (SR) y suelo libre (SL) se hizo mediante recuentos en placa en medio selectivo Gould‟s S1 con Str100 y Km50. Además, se observó al microscopio de fluorescencia el patrón de colonización sobre las raíces. El efecto sobre el desarrollo vegetal (PGP) se evaluó midiendo biomasa radical y aérea y altura.
Resultados:
La cepa comercial expuso gran capacidad para solubilizar fosfatotricálcico, como se esperaba, pero además se observaron altas actividades relativas en AL y AYH, las cuales están relacionados con el biocontrol en otras Pseudomonas (Sacherer et al. 1994, doi: 10.1111/j.1574-6968.1994.tb06694.x). El fenotipo de 1008-VM fue idéntico al salvaje y la inserción fue estable, representando un buen modelo para el ensayo en invernáculo. En éste, se observó que en los tratamientos B y C la colonización radical fue alta (con títulos entre 107-108 UFC/gr de muestras R). Sin embargo, en las muestras SL y SR, la variante marcada fue observada sólo en el tratamiento C. En conjunto, ésto sugiere la existencia de un comportamiento direccional no descripto hasta ahora: estas bacterias podrían desplazarse desde el sustrato hacia la raíz, pero no podrían colonizar el SL partiendo desde la superficie radical. Esto también indicaría que si se inocula en semilla, el efecto microambiental residual sería mínimo. Además, los títulos obtenidos en SL fueron 2 órdenes de magnitud menores en D respecto de C, sugiriendo que la planta también tiene un efecto sobre la supervivencia de la bacteria en el SL circundante. Los efectos PGP acompañaron las tendencias de colonización radical. Por microscopía de fluorescencia, se observaron dos patrones de colonización en superficie radical: difuso o en forma de cordón, según si la inoculación había sido en sustrato o en semilla, respectivamente, sugiriendo que la dinámica de colonización sería distinta en cada caso.
Conclusiones:
Estos resultados sugieren que el comportamiento de Rizofos® en el suelo varía según la metodología de la inoculación. JU 236
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Revista QuímicaViva Número 3, año 18, Diciembre 2019 quimicaviva@qb.fcen.uba.ar |
