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PLATAFORMAS PORTADORAS DE BLAVIM-2 EN DIFERENTES ESPECIES DE PSEUDOMONAS GRUPO PUTIDA: CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y EVENTOS INVOLUCRADOS EN SU DISEMINACIÓN

INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO (IBR-CONICET, FCBYF, UNR) 1; INEI-ANLIS "DR. CARLOS G. MALBRÁN" 2

Introducción y Objetivos:
La producción de ß-lactamasas constituye el principal mecanismo de resistencia a carbapenemes en bacilos Gram-negativos, siendo las metalo-ß-lactamasas (MßLs) adquiridas las de mayor relevancia clínica. En particular, VIM-2 es una de las MßLs prevalentes en el mundo, detectada esencialmente en el patógeno oportunista Pseudomonas aeruginosa (Pae), y en menor medida en especies ambientales/oportunistas de Pseudomonas grupo putida (P. g putida). El objetivo es caracterizar las plataformas involucradas en el ensamble y diseminación de elementos genéticos móviles (EGM) portadores de blaVIM-2 en especies de Pseudomonas spp así como evidenciar el rol de Pseudomonas spp. como “fábrica” ambiental de EGM de implicancia clínica, y de nexo entre especies ambientales y patógenos oportunistas.
Materiales y Métodos:
Se incluyeron aislamientos clínicos de P. g putida (n: 13) y de Pae (n: 1) productores de VIM-2 provenientes de pacientes de hospitales de Rosario o Buenos Aires. La identificación se basó en el análisis filogenético de secuencias concatenadas del ARNr 16S, gyrB y rpoD, e incluyó 19 cepas de referencia. La identidad de aislamientos de la misma especie fue establecida mediante OD-PCR. El gen blaVIM-2 y su entorno genético fueron identificados por PCR/secuenciación; y la localización del gen mediante ensayos de transferencia de ADN, así como digestión de ADN genómico con S1 o XbaIseguido de electroforesis en campo pulsado/Southern blot utilizando blaVIM-2 como sonda.
Resultados:
El análisis filogenético identificó 7 especies de P. g putida, incluyendo P. asiática (n: 4); P. putida (n: 2); P. monteilii (n: 2); P. g putida/II (n: 2); P. g putida/I (n: 1); P. g putida/V (n: 1); y una nueva especie asignada aquí como P. g putida/VII (n: 1). OD-PCR reveló clones diferentes para P. putida, P. monteilii y P. g putida/II. Por su parte, los 4 aislamientos de P. asiática constituyen 2 clones, PaA (n: 3) y PaB (n: 1). El entorno de blaVIM-2 en 13/14 aislamientos totales reveló que se encuentra en integrones/transposones (In/T) tipo-Tn402 con la maquinaria de transposición completa, denominados Tn6335 y Tn6336 (en 11/13 y 2/13 aislamientos, respectivamente), mientras que el aislamiento restante exhibe un In/T incompleto. El análisis de localización de las plataformas permitió identificar plásmidos conjugativos tipo-pLD209 portadores de blaVIM-2 en 6 cepas de P. g putida, denominados así por su similitud con pLD209 1; y un plásmido de elevado peso molecular en Pae. Los restantes aislamientos (n: 7) evidenciaron portación cromosomal de blaVIM-2.
Conclusiones:
Los resultados en conjunto muestran la capacidad de diferentes especies de P. g putida para intercambiar plásmidos y entre éstas con Pae; así como la funcionalidad del Tn6335 y Tn6336, detectados en plásmido como en cromosoma. Este análisis revela la prevalencia de dichos In/T y de plásmidos tipo-pLD209 en especies de P. g putida de nuestro país, y confirma la diseminación de blaVIM-2 ligada no sólo a cepas epidémicas, sino a la transferencia de EGM prevalentes. 1- Marchiaro et al., 2014. AAC 58:1816-1821.