QuímicaViva - Ver resumen

EL FLAGELO DE SERRATIA MARCESCENS EN LA INVASIÓN Y DISEMINACIÓN DE CÉLULAS EPITELIALES

MARISCOTTI, Javier Fernando | GARCÍA VÉSCOVI, Eleonora

INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO (IBR-CONICET, FCBYF, UNR)

Introducción y Objetivos:
Serratia marcescens es un patógeno oportunista en humanos y se encuentra ampliamente distribuida, en el medio ambiente y en un amplio rango de organismos hospedadores. En humanos puede producir una gran variedad de infecciones con creciente incidencia. Nuestro grupo demostró que S. marcescens es capaz de invadir, persistir y proliferar dentro de células no fagocíticas. Demostramos que la expresión flagelar es esencial para la adherencia a las células epiteliales y su posterior internalización en células no fagocíticas, lo que sugiere que el flagelo puede actuar como una adhesina. Utilizando células epiteliales, demostramos que la toxina formadora de poros ShlA de S. marcescens provoca una inducción extracelular de autofagia y que la bacteria puede sobrevivir y replicarse dentro de vesículas que reclutan marcadores de autofagia. Además, determinamos que S. marcescens puede escapar de las células no fagocíticas infectadas de una manera dependiente de ShlA. También mostramos que las bacterias que egresan de las células infectadas conservan la capacidad de invadir con éxito nuevas células epiteliales. Los objetivos de este trabajo, son analizar si la motilidad del flagelo y la quimiotaxis participan en los procesos de adherencia, invasión de células epiteliales. Además, evaluar la expresión intracelular del flagelo y su participación en el proceso de diseminación.
Materiales y Métodos:
Realizamos ensayos de adherencia, invasión de células epiteliales comparando la estirpe silvestre (Wt) con los mutantes de los genes motA y motB del motor flagelar y un mutante en el gen cheY de quimiotaxis. Analizamos la expresión intracelular del flagelo realizando ensayos de inmunofluorescencia indirecta y usando plásmidos reporteros en el vector pPROBE con los promotores de los genes flhD y fliA, reguladores maestros del flagelo. Determinamos los niveles de flagelina de las bacterias que egresan de las células infectadas mediante ensayos de inmunodetección.
Resultados:
Los mutantes motA y motB que tienen flagelo, pero no pueden moverlo, presentaron una menor adherencia e invasión que la cepa Wt, comportándose como las mutantes que no poseen flagelo. Mientras que la mutante cheY que posee un flagelo móvil pero no responde a los estímulos quimiotácticos presenta la misma capacidad de adherirse e invadir que la cepa Wt. Los resultados de inmunofluorescencia indirecta y los niveles de expresión determinados con los plásmidos reporteros muestran que S. marcescens expresa el flagelo en el interior de las células epiteliales, y las bacterias que egresan de las células infectadas también tienen flagelo.
Conclusiones:
La motilidad del flagelo de S. marcescens es esencial para la adherencia e invasión de las células epiteliales, pero la quimiotaxis es dispensable. S. marcescens es capaz de expresar el flagelo dentro de las células epiteliales y luego escapa al sobrenadante del cultivo de la célula hospedadora lista para propagarse con éxito a células no infectadas.