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Area: Replicación | Nro de orden: 1

Evaluación in vitro de la capacidad replicativa de recombinantes de Alfaherpesvirus bovino tipo 5 (BoHV-5) delecionados en su LR

Romero, SA; Silvestro, CA; Bratanich, AC.

Universidad de Buenos Aires, Facultad de Ciencias Veterinarias, Cátedra de Virología.

Contacto: silvina364@gmail.com

Alfaherpesvirus bovino tipo 5 (BoHV-5) es el agente causal de la meningoencefalitis no supurativa en terneros, un importante patógeno perteneciente a la subfamilia Alfaherpesvirinae que afecta la industria ganadera con alta prevalencia en Sudamérica. Con el fin de evaluar la función del gen relacionado a la latencia (LR) y su rol en la neurovirulencia en el contexto viral, se planteó la de producción de virus recombinantes. A partir de la cepa parental A663 (BoHV-5/1), se generó por recombinación homóloga un BoHV-5/1 delecionado en el promotor mínimo del gen LR para anular la expresión del mismo sin alterar la expresión de otros genes como el bICP0 (codificado en la cadena opuesta). Además se agregó el gen de la Green Fluorescent Protein (GFP) a fin de facilitar su identificación, obteniéndose así los virus recombinantes BoHV-5 LR5(-)GFP(+) y BoHV-5 LR5(-)GFP(-) como control. Se verificó por secuenciación que los sitios de recombinación no alteraran secuencias de genes que rodean la deleción. Nos propusimos evaluar el comportamiento de las cepas en estudio mediante el tamaño de placa de lisis, tamaño de placa de infección y sobrevida celular en células no neuronales. Se demostró que el virus con LR5 delecionado posee un tamaño de placa de lisis y de infección de la mitad respecto del virus salvaje y una sobrevida celular del 20% respecto de la cepa parental a las 24, 48 y 72 hs post-infección en las distintas MOI (0,05; 0,01 y 0,005). Estos resultados hacen suponer que el crecimiento del virus BoHV-5/1 con el gen LR deleteado posee un crecimiento poco eficiente. Considerando lo anterior se podría deducir que el gen LR jugaría un rol importante durante la infección lítica que conspira contra la actividad replicativa del virus. Aun queda pendiente dilucidar los mecanismos implicados en este déficit de replicación viral entre los que se podrían proponer tanto la presencia de una acción antiapoptótica como una interacción/regulación entre genes tempranos inmediatos u otros genes involucrados en este evento.