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Producción de inmunoglobulina Y aviar (IgY) específica anti-virus Junín

Maiza, A(1); Gamboa, G(1); Leiva, C(2); Canet, Z(3); Mogetta, H(1); Giovannoni, N(1); Chacana, P(2); Saavedra, MC(1).

(1) Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas Dr. Julio I. Maiztegui. INEVH-ANLIS; (2) Instituto de Patobiología, INTA; (3) Estación Experimental Agropecuaria Pergamino, INTA

Contacto: andreas.maiza@gmail.com

La Fiebre Hemorrágica Argentina (FHA) es una enfermedad viral infecciosa grave producida por el virus Junín (JUNV) perteneciente a la familia Arenaviridae. Para prevenir esta enfermedad existe una vacuna denominada Candid#1 (C#1) que se produce en el INEVH. Se requieren diferentes controles de calidad previos a su lebaración para su uso en humanos, entre ellos están los ensayos in vivo en los que se utiliza suero hiperinmune anti C#1 obtenido en conejo. Una alternativa al uso de conejos para la producción de anticuerpos (Ac) policlonales es la utilización de gallinas ponedoras. Está demostrado que el modelo aviar es útil para el desarrollo de Ac específicos para diferentes virus, tales como Sendai, chikungunya, dengue y otros, sin embargo, no hay estudios realizados con ningún arenavirus. La utilización de huevos de gallina para la producción de anticuerpos policlonales es de gran interés debido a que las inmunoglobulinas Y (IgY), en reemplazo de los anticuerpos de mamíferos, presentan grandes ventajas: alto rendimiento, técnica económica, no invasiva y no estresante para el animal, ya que no se requieren sangrados para la obtención de la inmunoglobulina. El objetivo del trabajo fue demostrar que las gallinas inoculadas con JUNV producen IgY anti C#1, permitiendo de esta manera reemplazar al conejo por el modelo aviar. Materiales y métodos: El día 0 se inocularon cuatro gallinas ponedoras de 20 semanas: dos con diluyente (gallinas controles C1 y C2) y dos, con una emulsión de la cepa patógena de JUNV (P3790) y adyuvante completo de Freund (ACF) en proporción 1: 1 (gallinas en estudio G1 y G2). El día 28 se inoculó una emulsión con C#1+1% Suero normal de gallina (SNG) y adyuvante incompleto de Freund (AIF) en proporción 1:1. Las inmunizaciones se llevaron a cabo por vía subcutánea e intramuscular. Se extrajo sangre a las gallinas G1, G2 y C1, C2 previo a la primera inoculación con P3790, y en los días 16 y 51 post inoculación (pi). Se recolectaron los huevos previos a la primera inoculación y entre los días 39 al 47 pi. Se extrajo la yema de cada huevo y los anticuerpos (Ac) fueron precipitados con sulfato de amonio y purificados por diálisis. La titulación de Ac anti C#1, fue realizada sobre monocapas de células Vero por prueba de neutralización (NT) por reducción del 80 % de UFP (unidades formadoras de placas). Resultados: El título de Ac NT anti C#1 en suero fue Negativo en la muestra pre inoculación y a los 16 días pi y se obtuvo un título de 1738 a los 51 días pi en la gallina G1. En el purificado de yema de huevos recolectados entre los 39 y 47 días pi el título de Ac NT fue 3583 en la gallina G1, mientras que en la gallina G2 y en las gallinas C1 y C2 los resultados fueron negativos tanto en las muestras pre como en las muestras pi. Conclusiones: Estos resultados sugieren que las IgY específicas anti-JUNV C#1 pueden ser producidas en gran escala y ser utilizadas como reactivo biológico tanto en los controles de calidad in vivo e in vitro de la vacuna C# 1, como en pruebas de ELISA y ensayos de IFI para el diagnóstico de JUNV.