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Area: Replicación | Nro de orden: 26

La modulación de la autofagia condiciona al virus Linfotrópico Humano Tipo 1 (HTLV-1).

Ducasa, N(1); Benencio, P(1); Grasso, D(2); Biglione, MM(1); García, MN(2); Berini, CA(1)

(1) CONICET-Universidad de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida (INBIRS). Buenos Aires, Argentina. (2) CONICET-Universidad de Buenos Aires. Instituto de estudios de la inmunidad humoral Prof. Ricardo a. Margni (IDEHU), FFyB-UBA. Buenos Aires, Argentina.

Contacto: nicolasducasa@gmail.com

Introducción La autofagia es un mecanismo catabólico, conservado en eucariotas y esencial para la homeostasis celular. Varios autores reportan como los virus manipulan el flujo autofágico para facilitar la progresión de la infección viral. Objetivo El objetivo de este estudio fue describir si la distribución de la proteína viral Tax es condicionada por el estado autofágico en células infectadas por HTLV-1. Específicamente, se evaluó la distribución celular de la proteína viral Tax en relación a la inducción o inhibición del flujo autofágico. Metodología Se infectó la línea celular HeLa con HTLV-1 por la técnica de co-cultivo con la línea celular MT2, persistentemente infectada. Se determinó la efectiva infección por Western Blot y citometría de flujo. Por medio de inmunofluorescencia indirecta y microscopía confocal se analizó la proteína viral Tax y el marcador de autofagia LC3 en las células HeLa infectadas. Luego, se realizaron tratamientos de inducción fisiológica de la autofagia con ayuno e inhibición del flujo autofágico en estadios iniciales con spautina-1 y tardíos con cloroquina, para determinar cómo se condiciona la distribución viral. Adicionalmente, se evaluó el comportamiento de Tax y LC3 en líneas linfoides como MT2 y en la línea celular Jurkat infectada por el virus. Resultados Se observó como la modulación de la vía autofágica por diferentes tratamientos provoca cambios significativos en el comportamiento de Tax. La inducción por ayuno de la autofagia provocó un incremento significativo del tamaño promedio de los dominios positivos de Tax en citoplasma. El tratamiento con los dos inhibidores de la vía autofágica, spautina-1 y cloroquina, indujo un aumento significativo en el número de dominios fluorescentes de Tax. Esto confirma que el comportamiento de Tax es condicionado por el estado de autofagia. Además, se observó cómo Tax se ubica en muchos casos asociado a membrana plasmática y en estructuras esféricas, las cuáles se observaron al hacer una reconstrucción 3D a partir de planos Z por microscopía confocal. Conclusiones Existe una clara relación entre el estadío de la autofagia y la distribución de la proteína Tax de HTLV-1. Los resultados sugieren un entrecruzamiento entre la vía autofágica y la proteínaTax en la infección por HTLV-1.