Area: Otros | Nro de orden: 29
Tau, R(1); Ferreccio, C(1); Torales, FA(1); Romera, SA(1, 2); Maidana, SS(2)
(1) Instituto Nacional de Tecnología agropecuaria (INTA); (2) IVIT (CONICET-INTA)
Contacto: rotau_1996@hotmail.com
El virus de la parainfluenza bovina tipo 3 (BPIV3) es un agente infeccioso respiratorio que afecta al ganado. Miembro del género Respirovirus, con un genoma de ARN no segmentado, su transmisión está asociada con fluidos nasales siendo aparentemente asintomático pero generando una predisposición a colonizaciones bacterianas e infecciones secundarias. Además, junto con otros virus y bacterias conforma el llamado complejo de respiratorio bovino (CRB) que causa pérdidas económicas para productores ganaderos. La técnica Gold standard para el diagnóstico serológico del virus es la inhibición de la hemoaglutinación sin embargo es un método laborioso y subjetivo por lo que resultó necesario contar con nuevas técnicas rápidas y sencillas de diagnóstico. Es por ello que nuestro grupo desarrolló y validó un ELISA de tipo indirecto para detección de anticuerpos bovinos y de cobayo. Con el fin de validar este ELISA en un formato kit comercial, se avanzó a la siguiente etapa: determinar la estabilidad del antígeno de las placas sensibilizadas y secas. Para ello se probaron tres tipos de placas (Inmulon 1B, Polysorp y Maxisorp) utilizando el método de estabilidad acelerada que consiste en sensibilizar las placas con buffers de saturación y post-saturación para estabilizar el antígeno y almacenarlas a 37°C por 3 dias (equivalente a estabilidad por 3-6 meses a 4°C) y 7 (equivalente a estabilidad por 1año a 4°C) días. El revelado fue con sueros (bovinos y cobayos) control positivo y negativo en diferentes diluciones. Para los ELISA PIV3 revelados con sueros de ambas especies y ensayado en placas Inmulon 1B resultaron estables por 1 año ya que el título de los sueros positivos fue idéntico a aquellas placas reveladas de manera inmediata sin almacenamiento. Los sueros ensayados en placas Polysorp mostraron títulos menores comparado al revelado en el momento tanto en las incubadas por 3 y 7 días. Respecto de la placa Maxisorp, los sueros ensayados mostraron títulos menores en las incubadas por 3 días y en las placas de 7 días no hubo detección. En conclusión, las placas Inmulon 1B sensibilizadas y estabilizadas para ELISA PIV3, dan resultado conforme y en coincidencia con la placa reveladas en el acto indicando que este protocolo permite la estabilidad por 1 año a 4°C.
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Revista QuímicaViva Número 1, año 19, Abril 2020 quimicaviva@qb.fcen.uba.ar |
