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Area: Biotecnología | Nro de orden: 39

Estudio de la utilización de anticuerpos de dominio único derivados de camélidos (VHH o nanoanticuerpos) como nuevas herramientas con potencial aplicación diagnóstica en Fiebre Aftosa.

Bozzo, J; Marchese, F; Seki, C; Periolo, O; Malirat, V; Grippo, V.

CEVAN - CONICET.

Contacto: joaquini.bozzo@gmail.com

La Fiebre Aftosa (FA) es una enfermedad viral del ganado de alto impacto económico. Existen siete serotipos del Virus de la FA (VFA), habiendo circulado en el país los serotipos O, A, y C. Argentina ha logrado el estatus de la OIE como país “libre de FA” con zonas donde se aplica y donde no se aplica la vacunación. La potencia de la vacuna es controlada lote a lote por un ELISA de Competición en Fase Líquida (CFL) que utiliza suero policlonal de conejo como anticuerpo (Ac) de captura. El reemplazo del suero por Acs monoclonales (mAcs) brindaría una mayor reproducibilidad entre lotes, una mayor especificidad analítica y la posibilidad del escalado de la producción de Acs idénticos. A su vez, los Acs de dominio único derivados de camélidos (nanoanticuerpos o VHH) han revolucionado el campo de los mAcs presentando alta especificidad y afinidad por su blanco, pero caracterizándose por sus propiedades únicas como alta estabilidad y producción simple. Los VHH se han convertido en herramientas novedosas y versátiles de aplicación diagnóstica, terapéutica y en investigación. Por esta razón, el presente trabajo tuvo como objetivo estudiar el uso de VHH específicos contra la cepa vacunal O1/Campos (O1C) del VFA como nuevos Acs de captura en ELISA. Para lograr tal objetivo, se inmunizaron dos llamas con la vacuna antiaftosa y se construyeron bibliotecas de VHH. En una primera etapa, se seleccionaron nanoanticuerpos (nanoAcs) específicos contra la cepa O1C por la metodología de “Phage Display”. De los 13 VHH más reactivos, se eligieron 4 para estudiar su uso como Ac de captura específico de la cepa O1C en ELISA. Estos VHH fueron expresados de forma soluble en E. coli y purificados por cromatografía de quelatos metálicos inmovilizados (IMAC). Se evaluó la captura del virus con distintas concentraciones de los VHH inmovilizados en placa de ELISA y se determinó la concentración óptima de uso. Como control positivo, se utilizó el suero policlonal de conejo generado contra la cepa O1C, empleado actualmente en ELISA CFL. La captura se realizó tanto con cada VHH como con paneles de combinaciones de los 4 nanoAcs. En todos los casos, la captura del virus por los VHH fue positiva y comparable a lo observado con el suero policlonal. Además, se estudió la especificidad analítica de los VHH como Ac captura de las otras tres cepas vacunales del VFA. Se observó que los VHH presentaron una mayor especificidad analítica en comparación con el suero policlonal, como era de esperarse. En conclusión, los 4 VHH empleados como Ac de captura en ELISA fueron capaces de inmovilizar el virus, mostrando mayor especificidad analítica que el suero policlonal. Más aun, estos VHH tienen la potencialidad de aumentar la reproducibilidad y simplificar las condiciones de captura en la técnica de ELISA CFL utilizada para el control de la potencia de la vacuna. Estos VHH representan una herramienta potencial y versátil para la innovación de las técnicas en el control de la Fiebre Aftosa.