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Area: Patogenia | Nro de orden: 41

Los exosomas de semen inhiben la infección del virus del Zika en células dendríticas

Paletta, AL; Varese, A; Castillo, L; Di Diego García, F; Cabrerizo, G; Geffner, J; Remes Lenicov, F; Ceballos, A

Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y SIDA, UBA-CONICET

Contacto: anapaletta@hotmail.com

En los últimos años se han reportado diversos eventos de transmisión sexual del virus Zika (ZIKV), cambiando el paradigma de la interacción arbovirus-huésped. Además, se ha observado que ZIKV infeccioso puede ser detectado en el semen hasta seis meses después del inicio de los síntomas. Por otra parte, el plasma seminal (PS) contiene billones de exosomas, pequeñas vesículas extracelulares que median la señalización intercelular. Sabiendo que el semen no es simplemente un portador de enfermedades de transmisión sexual, nuestro objetivo fue evaluar el papel de los exosomas de semen (SE) en la infección por ZIKV de las células dendríticas (CDs). Las muestras de plasma seminal fueron obtenidas de dadores sanos y los exosomas fueron purificados por medio de una cromatografía de exclusión por tamaño. Los preparados de vesículas fueron analizados por western blot y microscopía electrónica. Las CDs se obtuvieron a partir de monocitos de sangre periférica (mediante un gradiente de densidad) diferenciados con GM-CSF e IL-4 (30ng/ml) durante 5 días. La infección de ZIKV se cuantificó por qPCR, UFP/ml, citometría de flujo y microscopía de epifluorescencia. El fenotipo de las CDs se analizó por citometría de flujo. Se evaluó la proteómica de los preparados de exosomas. Inicialmente infectamos CDs (2X105) con ZIKV (2x105ufp) en presencia o ausencia de PS o PS depletado de SE (1/100 a 1/100000 dil) o SE (200ug/ml) durante 48 hs. Observamos que la presencia de PS inhibió la infección, mientras que PS-SE no lo hizo (p <0.05, n = 3). Los SE también fueron capaces de inhibir la infección por ZIKV (p <0.01, n = 8). Sin embargo, los exosomas purificados de plasma sanguíneo no inhibieron la infección(n = 3). La proteómica de los SE arrojó la presencia de proteínas ya descriptas en otras publicaciones, indicando la pureza de nuestros stocks de SE. Con el objeto de evaluar si los SE comprometían la unión del virus a la célula, se trataron CDs (1X106) con SE (200 ug/ml) 60 min, luego se incubaron con ZIKV (5x105 ufp) 2 hs y se lavaron tres veces para eliminar el virus libre. Observamos que la unión de ZIKV a CDs (n = 9) no estaba alterada. En el mismo ensayo estudiamos si los SE inducían IFN-I, encontramos que la presencia de SE inducía un aumento en la expresión de ARNm de IFN-β (p <0.05, n = 6). Adicionalmente, se observó un aumento en la expresión de moléculas efectoras de la respuesta de IFN-I (OAS, MX1, IRF7) 6hs post infección en CDs tratadas con SE (p <0.05-n = 6), lo que sugiere que IFN-β está involucrado en la inhibición de la infección por ZIKV en DC. Ensayos preliminares con un anticuerpo bloqueante del receptor de IFN-I (IFNAR/2) soportan estos resultados (n=2). Por último, analizamos el fenotipo de las CDs infectadas en presencia de SE. Las CDs expuestas a SE mostraron un aumento en la expresión de CD86 y CD83 (p <0.05-n = 4). Nuestras observaciones sugieren que SE inhiben la infección por ZIKV en CDsC induciendo un aumento de la expresión de IFN-B.