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Rol de viperina durante la infección con el arenavirus Junín ¿Una historia de amistad o enemistad?
Morell ML(1, 3); Nilsson, E(2); Överby, AK(2); Cordo, SM(3); García, CC(1)
(1) Laboratorio de Estrategias Antivirales, IQUIBICEN-CONICET, Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Argentina. (2) Department of Clinical Microbiology, Virology, Laboratory for Molecular Infection Medicine Sweden (MIMS), Umeå University, Umeå, Sweden. (3) Laboratorio de Procesos moleculares de la interacción virus- célula, IQUIBICEN-CONICET, Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Argentina.
Contacto: laurimorell@gmail.com
El virus Junín (JUNV) causa la Fiebre Hemorrágica Argentina y pertenece a la familia . Su genoma se compone de 2 moléculas de ARN simple cadena y ambisentido denominadas L y S las cuales codifican para 4 proteínas, todas ellas estructurales. El segmento L codifica para L, la ARN polimerasa ARN dependiente y Z, la proteína de matriz. S codifica para GPC, complejo glicoproteico y N, nucleoproteína.
Viperina es una proteína celular asociada a retículo endoplasmático, con actividad antiviral frente a diversos virus. Hemos demostrado en trabajos anteriores que ejerce un efecto antiviral sobre JUNV, sin embargo, el mecanismo antiviral permanece desconocido. Se sabe además que viperina interactúa con GBF-1, proteína celular que actúa como factor proviral de los virus ARN aunque se desconoce su función durante la infección con JUNV.
Con el objetivo de dilucidar el mecanismo antiviral de viperina se estudió la interacción entre dicha proteína y la glicoproteína viral GPC, a través de un ensayo de Co-InmunoPrecipitación (CoIP). Al demostrar la existencia de interacción entre ambas proteínas, se procedió a mapear la región de interacción empleando diferentes mutantes de viperina deletéreas para las regiones N terminal, dominio Radical SAM y C terminal, a través de ensayos de CoIP. Todas las versiones mutantes de viperina, demostraron interactuar con GPC de JUNV excepto por VipTN50 de localización nuclear. Se demostró también, que la estabilidad de GPC no es afectada por la sobreexpresión de concentraciones crecientes de viperina ya que no altera sus niveles de expresión. Por otro lado, se observó que la sobreexpresión de viperina alteró el nivel de GPC contenida en las Virus Like Particles (VLPs) cosechadas.
El rol de GBF-1 se investigó infectando células HEK293T con JUNV (MOI 0.1) y tratándolas con Golgicida A, inhibidor reversible de GBF-1. A través del método de placas se observó un 50% de disminución en la liberación de viriones infectivos. A su vez, células sobreexpresando viperina, GBF-1 o ambas proteínas fueron infectadas con JUNV (MOI 0.1), observándose a las 48 horas post infección una disminución en la expresión del ARNm viral (qPCR) como de viriones infectivos (método de placas) al sobreexpresarse viperina mientras que se observó un aumento de ambas variables al sobreexpresar GBF-1. Al sobreexpresar GBF1 y viperina se observó un rescate moderado de viperina sobre la actividad antiviral contra JUNV. Finalmente, demostramos la interacción entre GBF-1 y GPC a través de CoIP.
Dado que viperina no ejerce un efecto antiviral directo sobre GPC, el efecto podría ser indirecto a través del secuestro de GBF-1 para evitar su interacción con GPC y evitar la producción de viriones infecciosos como ha sido reportado para TBEV. Se estudiará si la sobreexpresión de GBF-1 y la coexpresión de GBF-1 y viperina afectan de alguna manera la liberación de GPC como VLP y se realizarán estudios de localización subcelular.
