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Area: Antivirales, Inmunidad y Vacunas | Nro de orden: 5

Nanoanticuerpos, potenciales moléculas antivirales para el virus de influenza A.

Pavan, MF; Gómez, JM; Ibañez, LI.

Instituto de Ciencia y Tecnología Dr. César Milstein, CONICET.

Contacto: mflorenciapavan@gmail.com

El virus de influenza A causa infecciones respiratorias en humanos y animales, y es responsable de epidemias estacionales en todo el mundo. Hasta ahora, las vacunas son la medida más efectiva para prevenir dichas infecciones, mientras que los antivirales representan una segunda estrategia para el control de la infección. Sin embargo, la aparición de múltiples cepas resistentes a estos antivirales ha marcado la necesidad de una mejora en el desarrollo de fármacos y de nuevas estrategias antivirales. Teniendo en cuenta esta necesidad, se han desarrollado nanoanticuerpos (VHHs) que reconocen una región conservada de la hemaglutinina (HA) de influenza. Los VHHs corresponden a la región variable de los anticuerpos de cadena pesada de camélidos y poseen ventajas en relación con los anticuerpos monoclonales, como su alta afinidad, especificidad, estabilidad y solubilidad y su bajo peso molecular y costo de producción. En este trabajo proponemos expresar y purificar los VHHs desarrollados y determinar el reconocimiento de los mismos frente a distintos tipos de virus de influenza A. A su vez, se plantea estudiar la capacidad inhibitoria de los VHHs monovalentes frente a la infección viral en modelo de ratón. Para la expresión de los VHHs monovalentes y bivalentes se utilizaron bacterias BL21, las cuales fueron transformadas con vectores de expresión pHEN6 que contienen la secuencia de los VHHs. Los mismos se obtuvieron en forma soluble desde periplasma y se purificaron mediante cromatografía de afinidad utilizando resinas de níquel. Tanto la expresión como purificación de los VHHs se analizó mediante y teñido con . Por otra parte, la capacidad de unión de los VHHs a la HA de los distintos tipos de virus de influenza se analizó mediante la técnica de ELISA, en donde se cubrieron microplacas (Maxisorp) con diluciones conteniendo 16 unidades hemaglutinantes de los diferentes subtipos de virus. Para el estudio de la capacidad inhibitoria, se utilizaron ratones BALB/c, a los que se administró intranasalmente VHHs en diferentes concentraciones, seguido de un desafío con el virus pH1N1. El peso de los ratones se monitoreó durante 14 días. Se lograron producir VHHs monovalentes y bivalentes, con rendimientos considerables, que tienen capacidad de reconocimiento heterotípica, ya que reconocen virus de influenza de distintos grupos filogenéticos. A su vez, los estudios preliminares en modelo de ratón mostraron que los VHHs poseen cierta tendencia a proteger de la infección viral. En este trabajo demostramos que es posible producir VHHs, que reconocen distintos tipos de virus de influenza, de manera sencilla, a bajo costo y con mucha pureza. Los VHHs generados serán utilizados para continuar con estudios e de la inhibición de la infección viral.