QuímicaViva - Ver resumen

Area: Antivirales, Inmunidad y Vacunas | Nro de orden: 54

Aplicación de CD40L y GEL01 en vacuna génica contra el Herpesvirus Bovino 1 (HVBo1) para potenciar la respuesta inmune del bovino

Kornuta, CA(1); Langellotti, C(1); Bidart, J(1); Soria, I(1); Quattrocchi, V(1); Gammella M(1); Angeletti P(1); Moore, DP(2, 4); Hecker, Y(2, 4); Cheuquepán Valenzuela, F(2, 4); Zamorano, P(1, 3)

(1)Instituto de virología e innovaciones tecnológicas (IVIT, INTA-CONICET); (2) CONICET; (3) USAL; (4) EEA Balcarce, INTA

Contacto: kornuta.claudia@inta.gob.ar

CD40 ligando (CD40L) es una molécula co-estimuladora que se expresa transitoriamente sobre linfocitos T activados. Se demostró que CD40L puede modular y aumentar la respuesta celular específica al administrarla junto a una vacuna génica. El adyuvante Montanide™ GEL01 tiene la capacidad de potenciar la transfección y reclutar células al sitio de inyección. Por primera vez se inoculó en bovinos una vacuna a ADN que codifica la glicoproteína D truncada del HVBo1 (pCIgD); junto con el adyuvante GEL01 y un plásmido codificando CD40L. Grupos de bovinos (n=4/5) de 1-2 años de edad fueron inoculados a los días 0, 30 y 60 con 1) 600µg pCIgD; 2) 600µg pCIgD-GEL01; 3) 600µg pCIgD-1mg CD40L-GEL01 y 4) 600µg pCIneo como control. A los 90dpv observamos títulos de anticuerpos contra HVBo1 en todos los grupos tratados con pCIgD, siendo la diferencia significativa en pCIgD-CD40L-GEL01 (p<0,01). Los títulos de IgG1 son significativos en el grupo pCIgD-GEL01 (p<0.001) y en pCIgD-CD40L-GEL01 (p<0.001) respecto a pCIgD. Al evaluar IgG2 se observa aumento en el grupo pCIgD-GEL01 y significativo para pCIgD-CD40L-GEL01 (p<0,01) respecto a pCIgD. El porcentaje de HVBo1 neutralizado respecto al grupo control fue superior en pCIgD-GEL01 (p<0.01) y en pCIgD-CD40L-GEL01 (p<0.01). A los 90 dpv los bovinos fueron desafiados con 5ml de 1x106.81 DICT50/ml de HVBo1 Los Ángeles. En algunos animales hubo retraso en la excreción viral y todos presentaron disminución respecto al control. La diferencia significativa se observa al 5 día post infección (dpi) en el grupo pCIgD-CD40L-GEL01 (p<0,001) y en pCIgD-GEL01 (p<0,01) comparado a pCIgD. El score clínico indica disminución de la sintomatología en pCIgD-GEL01 a los 6 dpi (p<0.01) y en pCIgD-CD40L-GEL01 a los 6 y 7 dpi (p<0.01) respecto al control. Ensayos de estimulación in vitro con GEL01 sobre células dendríticas obtenidas de vasos linfáticos aferentes de bovinos indujo regulación positiva de las moléculas de superficie CD40 (p<0.01) y MHCII (p<0.001) respecto al mock. A 12 dpi hubo linfoproliferación específica de células mononucleares de sangre periférica (PBMC). El índice de proliferación indica que un porcentaje mayor de animales del grupo pCIgD-CD40L-GEL01 proliferó en contacto con el virus comparado a los demás grupos. En sobrenadante de 12dpi se evaluó secreción de citoquinas por las PBMC estimuladas con virus y se observó un mayor número de animales secretores de IFNγ e IL-4 en el grupo pCIgD-CD40L-GEL01 respecto a los demás grupos, mientras que los niveles de TNFα fueron similares en todos los grupos. Los resultados demuestran que la combinación de CD40L y GEL01 es capaz de mejorar la vacuna a ADN; aumentando niveles de anticuerpos en suero, capacidad neutralizante, linfoproliferación específica y secreción de citoquinas involucradas en la inducción de una respuesta inmune humoral y celular. La disminución de la excreción viral luego del desafío es un dato de importancia cuando se evalúan vacunas contra el HVBo1.