Area: Replicación | Nro de orden: 57
Localización de la nucleoproteína de virus Junín y efecto de su expresión sobre el contenido total de Lipid Droplets celulares
Vazquez, CA(1, 2); Hayashi, J(3); Leon, K(3); Moreira, JP(3); Tomar, S(3); Ott, M(3); García, CC(2); Cordo, SM(1)
(1)Laboratorio de procesos moleculares de la interacción virus-célula, IQUIBICEN, UBA-CONICET; (2) Laboratorio de estrategias antivirales, IQUIBICEN, UBA-CONICET; (3) Gladstone Institutes
Contacto: cecilia.alejandra.vazquez@gmail.com
Las gotas lipídicas o (LD) son organelas actualmente descriptas como relevantes en la multiplicación de diferentes virus, tales como los virus dengue y polio, aunque inicialmente se las consideró simples sitios de almacenamiento de lípidos.
La Fiebre Hemorrágica Argentina está causada por el virus Junín (JUNV). Si bien existe una vacuna contra este virus, todavía no hay una quimioterapia disponible para tratar la enfermedad. JUNV es un virus envuelto que está conformado por cuatro proteínas: la nucleoproteína (N), asociada al genoma de ARN simple cadena, la ARN polimerasa (L), la proteína de matriz (Z) y la glicoproteína (G). En trabajos anteriores hemos observado que la modulación farmacológica de la biogénesis de los LD afecta los niveles de replicación viral. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la expresión de las proteínas virales sobre el número y tamaño de LD.
Para ello, se trabajó con las líneas celulares de hepatoma humano HepG2 y Huh.7, JUNV cepa IV4454 o vectores lentivirales que codifican para N o Z, fusionados a la secuencia Flag. Los cultivos celulares fueron infectados o transducidos por 48 horas. Las muestras infectadas se inmunomarcaron utilizando anticuerpos monoclonales contra N. Para las muestras transducidas, se utilizó un anticuerpo anti-Flag. Los LD se marcaron con la sonda LipidTox o con anti-perilipina 2, la proteína marcadora de LD. Mediante microscopía confocal de alta resolución se tomaron microfotografías de campos aleatorios. Utilizando imágenes en distintos planos focales y por medio de los softwares Imaris e ImageJ se realizaron reconstrucciones tridimensionales de cada célula y sus componentes. Se calculó el número y volumen de los LD por célula y se analizó la localización de las proteínas virales.
En el presente trabajo demostramos que la infección con JUNV provoca una disminución significativa en el número de LD en aquellas células infectadas respecto de las no infectadas. Mediante la expresión independiente de las proteínas virales observamos que N es capaz de producir este efecto en el contenido de LD, en ausencia del resto de los componentes virales. En cambio, la expresión de Z no generó diferencias significativas respecto del control.
Por otro lado, al analizar la localización de las proteínas virales observamos que una fracción N de JUNV está asociada a la superficie de los LD. Este fenotipo podría estar relacionado con la sublocalización celular de alguno de los productos de clivaje de N.
Estos resultados nos permiten concluir que N juega un rol importante en la modulación de los LD durante la infección, aunque todavía no puede descartarse la relevancia de otros componentes virales. Además, es posible que esto se deba a una interacción directa de la proteína con los LD. Los factores que pudieran mediar la interacción entre N y el metabolismo de LDs están siendo estudiados para determinar la relevancia funcional de la disminución de los LD en células infectadas con JUNV
