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Area: Clínica | Nro de orden: 61

Ausencia de evolución del reservorio de HIV-1 en circulación a lo largo de más de seis años de supresión virológica sostenida en niños infectados por transmisión vertical

Moragas, M(1); Golemba, MD(1); Distefano, M(1); Bologna, R(2); Mangano, A(1)

(1) Laboratorio de Biología Celular y Retrovirus-CONICET, Unidad de Virología y Epidemiología Molecular, Hospital de Pediatría “Prof. Dr. Juan P. Garrahan”; (2) Servicio de Epidemiología e Infectología, Hospital de Pediatría “Prof. Dr. Juan P. Garrahan”

Contacto: matias.moragas@gmail.com

Introducción La erradicación del HIV por parte de la terapia antirretroviral combinada (TARVc) no es posible, aun en niños infectados por transmisión vertical (TV) que iniciaron TARVc en las primeras horas de vida. Esto se debe, principalmente, al rápido establecimiento de formas replicativas del HIV-1 en células de larga vida dentro del huésped, las cuales se denominan reservorios virales. Por ello, el estudio del mecanismos de persistencia de los reservorios del HIV-1 es de gran importancia para la implementación de nuevas estrategias terapéuticas. Objetivo Determinar si el reservorio de HIV-1 en circulación evoluciona genéticamente y como es la dinámica del tamaño del mismo a lo largo de más de 6 años de supresión virológica sostenida (SV) en niños infectados por TV, que iniciaron TARVc tempranamente y alcanzaron la SV antes del año de vida. Metodología Se estudió mediante la plataforma MiSeq de secuenciación de nueva generación una región de 423 pb de p17gag del HIV-1 en 5 niños infectados por TV antes del inicio de TARVc y durante 6 a 15 años de supresión virológica (SV). Para reducir los errores asociados a la PCR y secuenciación, las secuencias con frecuencias menores al error del método (<0.5%) fueron fusionadas con aquellas más frecuentes que no diferían en más de un nucleótido, formando haplotipos. Se estudiaron las relaciones filogenéticas entre los distintos haplotipos mediante el método y se evaluó la presencia de evolución viral mediante el análisis de . Por otro lado, se estimó el tamaño del reservorio de HIV-1 previo y durante el TARVc eficaz a partir de la cuantificación por PCR en tiempo real semi-anidada de los niveles de ADN total, círculos de 2-LTR y ARN intracelular. Resultados Los 5 niños estudiados iniciaron TARVc y alcanzaron la SV a una mediana de 4 y 10 meses de vida respectivamente. A partir del análisis filogenético, no se observó asociación entre los haplotipos obtenidos y el tiempo de muestreo. Esto se vio reflejado en la formación de clados a partir de haplotipos pertenecientes a distintos tiempos de muestreo. Asimismo, la regresión lineal obtenida para cada niño estudiado mediante el analisis varió en un rango de R2 de 0,003 - 0,154, indicando la ausencia de evolución viral. Por otro lado, en la muestra de la última visita (6 a 15 años de SV) se observó una elevada abundancia de haplotipos idénticos a los encontrados previo al inicio de TARVc: 100%, 94%, 75%, 66% y 34%. Finalmente, el nivel de ARN de HIV-1 intracelular fue detectable en la totalidad de los niños estudiados con una mediana de 3,6 (RIC: 1,5 - 3,76) log10 copias/ug RNA; mientras que el nivel de círculos de 2-LTR solo fue detectable hasta el comienzo de la SV. Conclusiones Nuestros resultados aportan nuevas evidencias en que el mantenimiento de los reservorios de HVI-1 se debe principalmente a la expansión clonal de células infectadas previo al inicio de TARVc.